مائدیپتی مائکروسکوپی: طریقہ کار کے اصول

روشنی کو مزید غیر نامی اور نامی سیال کے جذب اور دوبارہ اخراج phosphorescence یا مائدیپتی کا نتیجہ ہے. مظاہر کے درمیان فرق روشنی بہاؤ کے جذب اور اخراج کے درمیان وقفہ کی مدت ہے. ان کے عمل میں مائدیپتی تقریبا بیک وقت پائے جاتے ہیں جب، جبکہ phosphorescence - کچھ تاخیر کے ساتھ.

تاریخی معلومات

1852 میں، برطانوی سائنسدان اسٹوکس، پہلی مائدیپتی بیان. انہوں نے کہا کہ کے ساتھ تجربات کا ایک نتیجہ کے طور پر ایک نئی اصطلاح متعارف کروائی fluorspar، بالائے بنفشی روشنی کے تحت لال پرکاش کا اخراج کرتا ہے. اسٹوکس ایک دلچسپ پہلو کی نشاندہی کی. اس فلوروسینٹ تابکاری کی طول موج ہمیشہ اتیجنا روشنی کے بہاؤ سے زیادہ ہے کہ پایا جاتا ہے.

19th صدی میں پرختیارپنا کی تصدیق کرنے کے لئے وہاں بہت سے تجربات ہوئے ہیں. وہ نمونے کی ایک قسم بالائے بنفشی روشنی کے اثر و رسوخ کے تحت fluoresce کہ دکھایا. مواد کے علاوہ، دوسری چیزوں رہا کرسٹل، رال، معدنیات، کلوروفل، خام منشیات، غیر نامیاتی مرکبات، وٹامن، تیل کے درمیان. حیاتیاتی ٹیسٹ کے لئے رنگ کے براہ راست استعمال صرف 1930 میں شروع ہوا

مائدیپتی مائکروسکوپی: تفصیل

20th صدی کے مطالعہ کی پہلی ششماہی میں استعمال ہونے والے مواد میں سے کچھ اعلی وضاحتی نمائش کی. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. طریقوں متضاد طرف سے حاصل نہیں کیا جا سکتا ہے جس کی کارکردگی، کے لئے شکریہ، مائدیپتی مائکروسکوپی کا طریقہ کار حیاتیاتی اور حیاتیاتی تحقیق میں ایک لازمی ذریعہ بن گیا ہے. اتنا ہی اہم نتائج حاصل، اور مواد کے لئے گئے تھے.

? کیا فوائد مائدیپتی مائکروسکوپی کا طریقہ کار کیا کرتا؟ نئے مواد کا استعمال کرتے ہوئے ممکن ہو اور انتہائی مخصوص سیل submicroscopic اجزاء کا انتخاب کیا ہے. مائدیپتی مائکروسکوپی واحد انو کا پتہ لگانے کر سکتے ہیں. رنگ کی ایک قسم کے ایک بار میں ایک سے زیادہ اشیاء کی شناخت اجازت دیتے ہیں. سامان، جس کے نتیجے میں، نمونے کی مخصوص خصوصیات پر منحصر ہے کے diffraction کے حد کی محدود مقامی قرارداد کے باوجود، اس کی سطح سے نیچے انووں کی شناخت بھی بہت ممکن ہے. شعاع ریزی نمائش autofluorescence بعد مختلف نمونے. یہ رجحان وسیع پیمانے شلا، نباتیات، سیمیکمڈکٹر صنعت میں استعمال کیا جاتا ہے.

خصوصیات

جانوروں کے ٹشوز یا پیتھوجینز اکثر پیچیدہ یا بہت کمزور یا بہت مضبوط unspecific autofluorescence مطالعہ. تاہم، مطالعے میں قدر ایک مخصوص طول موج میں بہت پرجوش مواد اجزاء میں تعارف اور اتسرجک ضروری روشنی بہاؤ شدت حاصل. Fluorochromes آزادانہ کے قابل رنجک ڈھانچے (ظاہر یا پوشیدہ) سے منسلک کے طور پر کام. اس طرح وہ ہدف کے لئے ایک اعلی selectivity، اور کوانٹم اپج ہے.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. مائدیپتی مائکروسکوپی وسیع پیمانے پر قدرتی اور مصنوعی رنگ کی آمد کے بعد سے استعمال کیا گیا ہے. انہوں اخراج اور اتیجنا کے بعض شدت پروفائلز دیوانہ اور مخصوص حیاتیاتی اہداف کو نشانہ بنایا.

انفرادی سالموں کی شناخت

اکثر ایسا ہوتا ہے، مثالی حالات میں، آپ ایک علیحدہ عنصر چمک رجسٹر کر سکتے ہیں. اس کے لئے، دوسری چیزوں کے درمیان، یہ ضروری پکڑنے والے اور نظری کے پس منظر کی ایک کافی کم شور فراہم کرنا ہے. وجہ photobleaching اخراج کر سکتے ہیں 300 ہزار. فوٹان کو ناکامی Fluorescein انو. عمل کا 20 فیصد مجموعہ کی کارکردگی میں اور تقریبا 60 ہزار کی رقم میں ان کو رجسٹر کر سکتے ہیں.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. ہمسھلن photodiodes یا الیکٹرانک ضرب کی بنیاد پر مائدیپتی مائکروسکوپی، محققین دوسری ذریعے انفرادی سالموں کے رویے کا مشاہدہ کرنے کی اجازت دی، اور بعض صورتوں میں اس سے بھی منٹ.

پیچیدگی

نظری شور کے پس منظر کے دمن کے حق میں ایک اہم مسئلہ ہے. حقیقت یہ فلٹرز اور لینس کچھ autofluorescence نمائش کے ڈیزائن میں استعمال کیا جاتا مواد کی بہت ابتدائی مراحل میں سائنسدانوں کی کوششوں ایک کم مائدیپتی ہونے اجزاء کی پیداوار پر مبنی رہے تھے کہ وجہ سے. تاہم، بعد کے تجربات نئی نتائج اخذ کرنے کی وجہ سے ہے. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. خاص طور پر، یہ محسوس کیا گیا مائدیپتی مائکروسکوپی، کل اندرونی عکاسی کی بنیاد پر، یہ ایک کم پس منظر اور زیادہ شدت اتیجنا روشنی حاصل کرنے کے لئے کی اجازت دیتا ہے.

طریقہ کار

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. مائدیپتی مائکروسکوپی کے اصولوں، کل اندرونی عکاسی پر مبنی evanescent لہر یا evanescent کا استعمال ہے. یہ مختلف میڈیا کے درمیان سرحد پر اس وقت ہوتی اپورتک سوچکانکوں. اس صورت میں، روشنی بیم PRISM کے ذریعے گزر جاتا ہے. یہ ایک اعلی اپورتک انڈیکس پیرامیٹر ہے.

PRISM کے کم پیرامیٹر کے ساتھ پانی حل یا گلاس سے ملحق. ایک زاویہ زیادہ اہم ہے کہ میں اس کی طرف سے ہدایت کی روشنی کی کرن ہیں، بیم مکمل طور پر انٹرفیس سے جھلکتی ہے. یہ رجحان، کے نتیجے میں، nonpropagating لہروں کا سبب بنتا ہے. دوسرے لفظوں میں پیدا برقی میدان کے ایک فاصلے کم 200 نینومیٹر کے لئے ایک کم اپورتک انڈیکس پیرامیٹر کے ساتھ ایک درمیانے درجے میں داخل ہوا.

evanescent لہر روشنی کی شدت fluorophores اتیجیت کرنے کے لئے کافی ہو جائے گا. تاہم، کیونکہ اس کے انتہائی چھوٹے گہرائی کی وجہ سے، اس کے حجم بہت چھوٹا ہو جائے گا. نتیجہ ایک کم سطح کے پس منظر ہے.

ترمیم

مائدیپتی مائکروسکوپی کل اندرونی عکاسی پر مبنی ہے، ای پی آئی-الیومینیشن کے ساتھ لاگو کیا جا سکتا ہے. یہ اعلی عددی یپرچر کے ساتھ لینس کی ضرورت ہوتی ہے (کم از کم 1.4، لیکن یہ اس 1.45-1.6 تک پہنچ ضروری ہے کہ)، اور جزوی طور پر روشن میدان اپریٹس. مؤخر الذکر ایک چھوٹی سی جگہ سائز کے ساتھ حاصل کیا جاتا ہے. زیادہ یکساں لئے ایک پتلی انگوٹی، جس ندی کے ایک حصہ کی طرف سے بلاک کیا جاتا ہے کا استعمال کرتے ہوئے. اہم زاویہ، جس کے بعد کل عکاسی ہوتی ہے کے لئے، ہم لینس میں وسرجن درمیانے اور خوردبین کے احاطہ گلاس کا اپورتن کی ایک اعلی سطح کی ضرورت ہے.